硬核難度下的敵人和機關的配置難度增強，而且部分道具的售價提高。硬核難度適合已經玩過生化危機4（2005）的玩家挑戰。
輔助難度適合純萌新，可開啓輔助瞄準；製作的彈藥量增加；進入危險狀態後體力會自動回覆到特定值；部分道具的售價降低。普通難度適合沒玩過原作的新玩家，無輔助瞄準和自動回覆。專家難度需要玩家通關一週目後解鎖，專家難度難度係數相對較高而且沒有自動保存功能，招架也僅限於精準時機
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