硬核难度下的敌人和机关的配置难度增强，而且部分道具的售价提高。硬核难度适合已经玩过生化危机4（2005）的玩家挑战。
辅助难度适合纯萌新，可开启辅助瞄准；制作的弹药量增加；进入危险状态后体力会自动回复到特定值；部分道具的售价降低。普通难度适合没玩过原作的新玩家，无辅助瞄准和自动回复。专家难度需要玩家通关一周目后解锁，专家难度难度系数相对较高而且没有自动保存功能，招架也仅限于精准时机
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